自體NK細胞的I期研究用于治療復發性髓母細胞瘤和室管膜瘤患兒

除了原發部位復發外，三名患者還患有LMD。

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安全性評估

這是第一項證明112次腦室內NK細胞輸注（98 次通過第四腦室，14次通過側腦室）的安全性的研究，沒有DLT。AE見表 2。

一名接受過多種先前治療的患者在基線時出現1級血小板減少癥，在NK細胞輸注期間增加到2級，并在7天內恢復到基線 1 級。骨髓評估沒有顯示異常病理的證據。實現了主要目標，這證明了NK細胞生產、釋放和腦室內輸注的安全性的可行性。

影像評估

圖2 (A-C) 患者8：對比后T1加權MR圖像顯示右額葉不規則的腦室內和腦室周圍增強腫瘤。

(A) 輸注前腫瘤大小和特征。

(B) 第5次輸注后，腫瘤呈不規則環狀強化，中央壞死。

(C) 輸注后10天，腫瘤大小繼續最小化，增強增強。

圖2(D-F)患者9：通過后顱窩的增強后T1加權圖像顯示沿Luschka右孔居中至橋腦延髓池的強化髓母細胞瘤，侵犯相鄰腦橋和右小腦中腳。

(D)NK細胞輸注前的對比后T1圖像。

(E) 2次NK細胞輸注后的對比后圖像。腫瘤的大小增加了9%。

(F) 第二次NK細胞輸注后30天的對比后圖像顯示腫瘤大小保持穩定。

CSF評估和生物標志物相關性

對于發生術后假性腦膜膨出的患者7，第3周期輸注2的CSF的CyTOF分析顯示來自第四腦室的樣本中NK細胞占主導地位，其表型與假性腦膜膨出不同，具有顯性分化簇(CD)57 和NK組2成員D(NKG2D) 表達（圖 4A）。

SPADE（密度歸一化事件的生成樹進展分析）的分析揭示了廣泛的 NK 細胞亞群。值得注意的是，一部分CD16+NKp30+ NK 細胞表現出高表達的活化標記物（人類白細胞抗原 D 相關[HLA-DR+]、CD69+和CD25+）（圖 4B）。

影像學分析

第一項評估放射組學在兒科過繼免疫治療中的作用的研究確定了從7名患者的NK 細胞未治療MRI掃描中提取的放射組學特征。7名患者中有5名的放射學反應是可評估的；如前所述，排除了患者1和5。實現了高放射學性能；準確性、敏感性和特異性均為100%，但未達到統計學顯著性，可能是由于患者數量少（補充圖4A）。無監督層次聚類方法同時將患者和特征聚類為子聚類，產生患者分層標簽和低維特征表示。如補充圖4B所示，我們確定了2個基于放射組學的集群，它們分別與2名患者（一名患有SD，另一名具有放射學反應）和那些患有進行性疾病的患者重合。

眾所周知，NK細胞在抗腫瘤免疫中發揮重要作用，如各種人類癌癥所示。NK細胞作為抗腦腫瘤效應物的潛力已在體外和體內得到證實。使用NK的臨床研究細胞已經在腦腫瘤中進行了研究，但迄今為止還沒有在兒科神經腫瘤學中進行過探索。NK細胞表達大量受體，這些受體在識別靶細胞上的特定配體時觸發NK細胞的溶細胞活性。髓母細胞瘤上調NK細胞激活受體（如NKG2D和天然細胞毒性受體）的配體，從而誘導NK細胞介導的髓母細胞瘤細胞的細胞毒性和凋亡。

髓母細胞瘤和其他兒童腦腫瘤中NKG2D配體表達的增加促進了NK細胞介導的免疫監視減少，并有助于創造一個免疫抑制性較低的腫瘤微環境。這種現象可能會改善小兒腦腫瘤中NK細胞的運輸和功能。

如前所述，我們的臨床前工作表明NK細胞在髓母細胞瘤和非典型畸胎樣橫紋肌樣瘤中具有細胞毒性。鑒于局部給藥途徑和不良免疫反應的可能性，我們以較低劑量開始多次輸注。實現了可行性/安全性的主要目標。

該研究還評估了基于成像的抗腫瘤活性作為次要目標。患者8在證明PD之前有一個短暫的SD（有放射學變化）。除了患者9在隨訪期結束時出現SD外，所有患者在治療期間和/或治療結束時均表現出病變大小的增加和/或臨床下降。

使用流式細胞術和CyTOF進行的腦脊液分析顯示NK細胞的積累和持久性以及CD3+ T細胞的流入，表明冷凍保存的細胞保留了活力和功能。在這里，在一些足夠大的樣本中，可以進行深入的CyTOF分析，觀察到T細胞成分同樣包含CD4和CD8 T細胞，以及非常少的CD25+CD127? 調節性T細胞成分，表明注入的NK 細胞促進效應T細胞遷移到腦脊液中。反復輸注冷凍保存的NK細胞也與NK細胞的持久性和積累有關（如 CSF 生物標志物評估所示）。

我們使用自體NK細胞啟動了這項試驗，以證明通過鞘內途徑遞送的擴增NK細胞的安全性。盡管是I期單藥治療安全性/可行性研究，患者人數少，NK細胞劑量水平和間隔多，研究持續時間有限，3個周期，這排除了將PD與PsD區分開來，但目前的試驗證明了該方法的安全性。

然而，產生患者特異性自體產品所固有的成本、治療延遲和有限的劑量是顯著的。使用自體NK細胞的潛在問題，包括冷凍、解凍，以及與同種異體細胞相比它們的功效降低，現在已經為人所知。除了由于暴露于轉化生長因子β、色氨酸代謝物、腺苷和慢性刺激而導致自體NK細胞功能低下和耗竭之外，還可以選擇同種異體NK細胞通過殺傷性免疫球蛋白樣受體(KIR)獲得額外的抗癌功能。配體錯配和高活化KIR含量。因此，在未來的試驗中，有必要在這種情況下對來自同種異體來源的 NK 細胞進行安全測試。