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疫苗抗原可以以多種形式呈現，包括細胞內、分泌、膜結合或細胞外囊泡 (EV)。這些抗原表現形式中哪些是否在免疫誘導方面具有優勢仍不清楚。來自英國帝國理工學院的研究人員使用GFP作為報告基因和模型抗原，比較了來自一系列病毒糖蛋白的跨膜結構域的EV靶向效率發現，在EV上的病毒跨膜結構域抗原可增強抗原免疫原性。該研究發表于J Extracell Vesicles雜志上。?

疫苗接種是防治傳染病最有效的方法之一。傳統的病毒疫苗屬于減毒活或滅活病毒，雖然有效，但通常會引起不良反應。近年來，疫苗研發的重點已轉移到開發安全有效的替代疫苗平臺，包括基于亞單位蛋白、納米顆粒和核酸的疫苗平臺。雖然新開發的平臺總體上可以顯著提高安全性，但還存在其他限制，例如低免疫原性。抗原是疫苗中的關鍵成分，負責誘導抗原特異性免疫反應。設計和優化抗原以提高免疫原性是提高疫苗效力的策略之一。?

核酸疫苗平臺（例如DNA和RNA疫苗）易于設計和制造，從而縮短開發時間并降低疫苗成本。當通過核酸平臺啟動疫苗研發時，根據疫苗的設計，抗原可能會在細胞內表達、分泌或在細胞表面表達。或者可以設計用于在細胞外囊泡 (EV) 內部或表面表達。這些不同呈遞形式的抗原具有不同的特性，很可能針對和暴露于不同的微環境。例如，分泌型和EV相關形式的抗原可以從生產地點遠程傳播到免疫誘導位點，而細胞相關形式（細胞內和細胞膜結合抗原）只在原地停留。分泌性或EV膜表面抗原比細胞內或EV內抗原更容易被B細胞和其他抗原呈遞細胞(APC)識別。由于許多病毒疫苗抗原候選者是三聚體跨膜糖蛋白，細胞和EV 膜結合抗原具備這樣的跨膜結構域，能使疫苗抗原更接近天然構象。鑒于以不同形式呈遞抗原的潛力，病毒抗原所在位置的免疫原性仍然是研究的重要焦點。

EV（例如外泌體）是由幾乎所有類型的細胞釋放的脂質雙層封閉結構。盡管 EV 生物發生的確切機制仍然難以闡明，但眾所周知，將“貨物”裝載到EV上是一個選擇性過程。先前的研究表明，幾種病毒糖蛋白在EV表面表達。此外，早期的研究表明，水泡性口炎病毒(VSV) G蛋白的跨膜結構域包含EV靶向信號，并且VSVG跨膜融合蛋白會被加載到EV表面。是否可以通過其他跨膜病毒糖蛋白實現EV靶向性，以及不同跨膜蛋白的EV靶向效率是否會有所不同，還有待研究。?

在這項研究中，研究人員使用GFP作為模型抗原，首先比較了各種病毒糖蛋白的跨膜結構域的EV裝載效率，然后研究了EV結合的GFP (EV-GFP) 是否會增強免疫誘導。數據顯示，與病毒跨膜融合的GFP已成功加載到EV表面。此外，結合GFP的EV主要與外泌體標記物 CD81相關。在小鼠中對EV-GFP質粒產生的免疫原性研究表明，與可溶性和細胞內GFP相比，EV-GFP產生的抗原特異性IgG和IgA顯著增加。同樣，在用EV-GFP免疫的小鼠中，抗原刺激的脾細胞產生的與GFP特異性T細胞反應相關的細胞因子也得到了增強。用純化的可溶性GFP和GFP EV進行的免疫原性研究進一步證實了EV-GFP在小鼠中的免疫增強特性。體外攝取測定表明，EV-GFP比可溶性GFP更有效地被小鼠脾細胞攝取，并且這種攝取是B細胞優先的。總之，這些數據表明病毒跨膜蛋白可以有效地將抗原加載到EV表面，并且EV結合抗原增強了體液和細胞介導的抗原特異性反應。?

參考文獻：Presentation of antigen on extracellular vesicles usingtransmembrane domains from viral glycoproteins for enhanced immunogenicity. JExtracell Vesicles. 2022 Mar;11(3):e12199.

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