多發(fā)性硬化癥中的記憶B細(xì)胞

多發(fā)性硬化癥（MS）是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的慢性炎癥性脫髓鞘疾病，其病程多變且不可預(yù)測，可表現(xiàn)為多種生理和認(rèn)知癥狀。T細(xì)胞和B細(xì)胞現(xiàn)在被認(rèn)為是多發(fā)性硬化癥發(fā)病機(jī)制中的中心介質(zhì)，自從1942年發(fā)現(xiàn)CSF-IgG升高以來，B細(xì)胞抗體介導(dǎo)的免疫就與MS的發(fā)病機(jī)制息息相關(guān)。

最近，隨著以CD20為靶點(diǎn)的B細(xì)胞去除療法的成功，非抗體分泌B細(xì)胞作為MS免疫發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵角色的作用受到了進(jìn)一步的關(guān)注。這些療法，包括 rituximab，ocrelizumab 和ofatumumab 減少了新的炎癥病變和復(fù)發(fā)，盡管保留了大多數(shù)ASCs，即CD20-漿細(xì)胞和一些漿母細(xì)胞。在非ASC B細(xì)胞亞型中，記憶B細(xì)胞（Bmem）在調(diào)節(jié)MS免疫過程中的作用受到越來越多的關(guān)注。Bmem有幾個(gè)獨(dú)特的特征，包括延長壽命，對(duì)抗原再暴露的快速反應(yīng)能力，以及作為抗體分泌細(xì)胞的前體。

Bmem是免疫記憶中的一個(gè)關(guān)鍵角色，它遇到抗原后一直處于靜止?fàn)顟B(tài)，直到再次暴露于抗原，此時(shí)對(duì)第二次攻擊迅速作出反應(yīng)。在第一次接觸病原體時(shí)，大多數(shù)Bmem來自生發(fā)中心（GC），GCs是次級(jí)淋巴組織（SLT）內(nèi)的特殊結(jié)構(gòu)，在SLT中，成熟的、有抗原暴露的B細(xì)胞與T細(xì)胞發(fā)生同源相互作用，增殖，經(jīng)歷體細(xì)胞超突變以增加B細(xì)胞受體（BCR）對(duì)抗原的親和力，進(jìn)行免疫球蛋白（Ig）同型轉(zhuǎn)換。GC-B細(xì)胞最終選擇分化為抗原特異性、同型轉(zhuǎn)換的抗體分泌（ASC）B細(xì)胞或Bmem。

目前，Bmem與ASC分化的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。許多因素已被提出有助于Bmem的形成，動(dòng)物模型表明，轉(zhuǎn)錄因子BACH2選擇具有中等親和力的GC B細(xì)胞分化為Bmem。此外，Bmem的產(chǎn)生與ZBTB32、KLF2、ABF-1、STAT5、BCL-6和SKI等因子的表達(dá)增加有關(guān)，這些因子通常抑制向ASC表型的分化。細(xì)胞因子包括IL-24和IL-9能促進(jìn)Bmem的形成，此外，在體外，IL-2、IL-10和CD40L被證明參與了GC B細(xì)胞向Bmem表型的分化。

在體外，Bmem向CXCL12、CCL19和CXCL13遷移，表明這些趨化因子可能參與SLT內(nèi)的運(yùn)動(dòng)和向生存龕或炎癥部位的運(yùn)輸。如果長期存在于骨髓中的漿細(xì)胞產(chǎn)生的體液免疫不足以消除病原體，Bmem就會(huì)積極參與炎癥反應(yīng)。在再次暴露于抗原后，Bmem將產(chǎn)生相對(duì)于原始B細(xì)胞更快速和有效的抗原特異性反應(yīng)。

在人類中，Bmem通常通過腫瘤壞死因子超家族成員CD27的表達(dá)來鑒定。然而，CD27并非Bmem所獨(dú)有，CD27也在GC B細(xì)胞和后GC B細(xì)胞上表達(dá)，包括ASC。?

因此，CD27的表達(dá)應(yīng)與低水平CD23以及ASC標(biāo)記物CD138（syndecan-1）的缺乏相結(jié)合，以鑒定人類Bmem。進(jìn)一步包含CD38、CD21、CD24、CD19、B220、FCRL4（FcRH4）以及CD25的特征性標(biāo)記可以描繪異質(zhì)性的Bmem群體。

在嚙齒動(dòng)物模型中，Bmem數(shù)量少且CD27表達(dá)缺失，這阻礙了Bmem的鑒定。小鼠研究已經(jīng)提出至少10個(gè)Bmem亞群，利用Ig等分型結(jié)合CD80、PDL-2、CD73、CD38的表面表達(dá)。然而，這些標(biāo)記可能在其他小鼠B細(xì)胞亞型上也表達(dá)，因此，識(shí)別Bmem需要一組不同的表面標(biāo)記。

與原始的成熟B細(xì)胞相比，Bmem表現(xiàn)出一些獨(dú)特的特征。Bmem延長了壽命，并且可以不依賴抗原存活數(shù)年，甚至伴隨宿主的一生。相比之下，原始的成熟B細(xì)胞壽命只有幾周。與成熟的B細(xì)胞不同，Bmem能夠快速增殖并分化為ASC，刺激要求很低，包括再次暴露于低水平抗原、T細(xì)胞幫助或多克隆刺激。

一旦被激活，Bmem可以遵循兩條途徑：1）快速分化為ASC；2）重新進(jìn)入次級(jí)GC進(jìn)行進(jìn)一步的親和力成熟和同型轉(zhuǎn)換。Bmem向ASC分化有助于快速、大量地產(chǎn)生高親和力抗體，以補(bǔ)充終末分化漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體。除了向ASC快速分化外，Bmem還是有效的抗原呈遞細(xì)胞（APC），表達(dá)MHCII，不僅能夠有效識(shí)別抗原，而且能夠處理抗原呈遞以激活其他免疫細(xì)胞，包括T細(xì)胞。最后，Bmem可以產(chǎn)生大量的細(xì)胞因子，包括TNF、GM-CSF、IL-6、淋巴毒素（LT）和IL-10。

在MS中，B細(xì)胞位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多個(gè)腔室內(nèi)，包括腦脊液（CSF）、腦實(shí)質(zhì)和腦膜。Bmem在腦脊液高于外周血，并且占到了B細(xì)胞的大多數(shù)。然而，對(duì)MS中Bmem的研究主要集中在外周血和腦脊液。此外，關(guān)于Bmem的定義存在顯著差異，大多數(shù)研究僅基于CD27表達(dá)來定義。因此，對(duì)于每一項(xiàng)研究，要注意用于定義Bmem的表面標(biāo)記。

抗體產(chǎn)生和抗原特異性

追蹤Bmem轉(zhuǎn)化為ASC以研究體內(nèi)抗體的產(chǎn)生和特異性仍然具有挑戰(zhàn)性，通常需要專門的小鼠模型。或者在體外，利用特異性觸發(fā)Bmem分化的多克隆激活劑，包括TLR7/8激動(dòng)劑R848，可以刺激Bmem轉(zhuǎn)化為ASC。隨后可量化Bmem，并可評(píng)估Ig類型和抗體產(chǎn)生。

Hohmann等人從MS患者的外周血中分離出B細(xì)胞，并比較了ASC或Bmem衍生的ASC產(chǎn)生的IgG抗體，研究發(fā)現(xiàn)Bmem來源的ASCs分泌IgG能力更強(qiáng)。

MS中的B細(xì)胞抗原特異性尚不清楚，但已證明是異質(zhì)性的，抗體靶點(diǎn)從自身抗原到病毒抗原不等。關(guān)于Bmem，目前很少有研究。Hohmann等人檢查了對(duì)正常人腦裂解物的反應(yīng)性，在30例復(fù)發(fā)緩解型多發(fā)性硬化（RRMS）患者中，有15例患者的外周血中存在腦反應(yīng)性Bmem衍生的ASC，腦反應(yīng)性B細(xì)胞（包括Bmem）的存在預(yù)示著復(fù)發(fā)。在健康獻(xiàn)血者或其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病對(duì)照者的外周血中未觀察到腦反應(yīng)性B細(xì)胞。

抗原呈遞

Bmem通常被認(rèn)為是有效的抗原遞呈細(xì)胞。在MS中，與原始B細(xì)胞相比，CSF中的Bmem（CD27+IgD-）顯示兩種共同刺激分子的表達(dá)上調(diào)，這兩種分子是抗原呈遞功能的關(guān)鍵，即CD80和CD86。

與這些發(fā)現(xiàn)一致，從RRMS患者分離的離體Bmem（CD19+CD27+）在抗原（包括破傷風(fēng)類毒素、髓鞘堿性蛋白和髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞蛋白）存在下能夠誘導(dǎo)自體CD4 +T細(xì)胞增殖和IFN-γ產(chǎn)生。

細(xì)胞因子產(chǎn)生

MS患者的B細(xì)胞，包括Bmem，可能表現(xiàn)出一種細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失調(diào)的傾向。與健康對(duì)照組相比，MS患者外周血中Bmem（CD27+）產(chǎn)生GM-CSF增加。此外，與健康對(duì)照組相比，從RRMS和SPMS患者外周血分離的體外刺激B細(xì)胞顯示出抗炎細(xì)胞因子IL-10的產(chǎn)生減少，而LT和TNF水平相當(dāng)。

與原始B細(xì)胞相比，從健康捐贈(zèng)者獲得的體外刺激的Bmem也顯示出較低水平的IL-10，因此，無論疾病的發(fā)病機(jī)制如何，低水平的IL-10似乎是典型的Bmem特征。因此，在RRMS和SPMS患者中觀察到的B細(xì)胞產(chǎn)生IL-10的減少可能歸因于另一種B細(xì)胞表型，包括產(chǎn)生IL-10的調(diào)節(jié)性B細(xì)胞或ASC。

與臨床疾病的關(guān)系

在RRMS患者中，與復(fù)發(fā)期相比，CD5+Bmem亞群的增加與緩解期相關(guān)。此外，Nissimov等人證實(shí)，外周血Bmem頻率升高與擴(kuò)展殘疾狀態(tài)評(píng)分降低相關(guān)。相反，Comabella等人確定RRMS患者外周血中非同型轉(zhuǎn)化和同型轉(zhuǎn)化Bmem（CD19+CD27+IgD+或IgD-）的增加與MRI表型高度神經(jīng)退行性變有關(guān)。

兒童和成人MS患者外周血中的Bmem也不同。在小兒多發(fā)性硬化癥中，與健康兒童和青少年相比，外周血中Bmem（CD20+CD27+）升高。成人MS患者外周血同型轉(zhuǎn)化Bmem（CD20+CD27+IgD-）和漿細(xì)胞升高，而兒童MS患者非同型轉(zhuǎn)化Bmem（CD20+CD27+IgD+）和漿細(xì)胞增多。

B細(xì)胞靶向免疫調(diào)節(jié)療法

以CD20為靶點(diǎn)的B細(xì)胞耗竭療法，包括rituximab, ocrelizumab和ofatumumab，清除除了ASC和前B細(xì)胞外的所有B細(xì)胞，在降低RRMS患者的臨床復(fù)發(fā)率和新病灶形成方面具有顯著療效。抗CD20治療后，MS患者外周血中包括Bmem在內(nèi)的B細(xì)胞顯著減少，治療后6個(gè)月外周血B細(xì)胞依然明顯減少。

在rituximab治療的患者中，RRMS患者的腦脊液B細(xì)胞也減少了，而PPMS患者的腦脊液B細(xì)胞僅顯示為中度減少。在RRMS患者中，rituximab治療可使外周血中產(chǎn)生GM-CSF和IL-10的B細(xì)胞比例正常化。治療后8至24個(gè)月，在外周血出現(xiàn)的B細(xì)胞中記憶性B細(xì)胞明顯減少。

進(jìn)一步的B細(xì)胞靶向治療已經(jīng)開始尋求針對(duì)更多樣化的B細(xì)胞表型。Inebilizumab（MEDI-551），一種抗CD19單克隆抗體，靶向從前B細(xì)胞到漿細(xì)胞的所有類型。與同樣在CD4+T細(xì)胞亞群上表達(dá)的CD20不同，CD19僅在B細(xì)胞上表達(dá)。與抗CD20導(dǎo)向療法類似，RRMS患者的治療導(dǎo)致外周血B細(xì)胞減少和釓增強(qiáng)病變減少。

針對(duì)B細(xì)胞生存因子的B細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)療法顯示出不同的臨床結(jié)果。Atacicept治療RRMS患者導(dǎo)致年化復(fù)發(fā)率增加，釓增強(qiáng)病變未改變， II期臨床試驗(yàn)提前終止。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中，atacicept治療導(dǎo)致外周血中Bmem的數(shù)量增加，證實(shí)了先前的研究，Bmem可以幸免。類似地，一種能阻斷未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞和ASC存活的抗BAFF單克隆抗體tabalumab也不能清除Bmem。外周血中的Bmem增加，在RRMS患者中未觀察到釓增強(qiáng)病變的減少。

最近，以B細(xì)胞為靶點(diǎn)的多發(fā)性硬化療法已經(jīng)擴(kuò)展到包括布魯頓酪氨酸激酶（BTK）抑制劑。BTK是通過BCR、FcγR和GM-CSF受體傳遞信號(hào)的關(guān)鍵酶，BTK抑制作用影響骨髓細(xì)胞，包括小膠質(zhì)細(xì)胞，以及除T細(xì)胞、漿細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞外的其他造血系細(xì)胞。BTK抑制劑evobrutinib、tolebrutinib、fenebrutinib、orelabrutinib和B11091目前正在臨床上開發(fā)用于復(fù)發(fā)和進(jìn)展型MS。在臨床試驗(yàn)中，BTK抑制劑可減少釓增強(qiáng)病變和新的或擴(kuò)大的T2低信號(hào)病變，但不能降低RRMS患者的年復(fù)發(fā)率或疾病進(jìn)展。初步研究顯示，在48周的治療期間，監(jiān)測用evobrutinib治療的RRMS和SPMS患者的外周血B細(xì)胞總數(shù)或Bmem沒有臨床相關(guān)的變化。

其他免疫調(diào)節(jié)療法

許多用于MS的免疫調(diào)節(jié)療法也被觀察到影響B(tài)mem。盡管傳統(tǒng)上意義上認(rèn)為這些療法不能調(diào)節(jié)B細(xì)胞，但它們可以直接或間接地影響B(tài)mem的存活和功能。IFN-β、醋酸格拉替雷、芬戈莫德、富馬酸二甲酯和米托蒽醌均能減少外周血中Bmem的數(shù)量，并改變治療后的B細(xì)胞整體功能。

多種其他免疫調(diào)節(jié)療法（包括克拉屈濱、特氟米特、daclizumab和alemtuzumab）均能有效改善RRMS患者的臨床轉(zhuǎn)歸，這些療法均能降低外周Bmem數(shù)，盡管治療后B細(xì)胞功能改變的相關(guān)結(jié)果仍有待確定。

MS的病因尚不清楚，但越來越多的證據(jù)表明，多種B細(xì)胞表型是MS發(fā)病機(jī)制的核心因素。在多發(fā)性硬化癥中，外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的Bmem正在被越來越多地探索，以確定與疾病發(fā)展和進(jìn)展的確切關(guān)系。

已有的研究結(jié)果顯示，MS患者外周血和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的Bmem發(fā)生改變，在抗體產(chǎn)生、抗原呈遞和細(xì)胞因子產(chǎn)生中發(fā)揮潛在的致病作用。利用現(xiàn)有的免疫調(diào)節(jié)療法有效地靶向Bmem，可以緩解MS。

未來的研究應(yīng)致力于解決幾個(gè)關(guān)鍵的尚未解決的問題，以提供有關(guān)MS中Bmem的更深入的見解，包括轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制、CNS中不同部位內(nèi)的作用、MS免疫發(fā)病機(jī)制中的功能相關(guān)性，以及確定與臨床結(jié)果的關(guān)聯(lián)。這些見解可能有助于指導(dǎo)治療策略，以開發(fā)新的藥物并改善目前的治療方案。

參考文獻(xiàn)：

1.?Memory B Cells in Multiple Sclerosis:Emerging Players in Disease Pathogenesis. FrontImmunol.?2021; 12: 676686.