外泌體方法總結(jié)

外泌體的提取方法
1:超速（差速）離心法：通過低速、高速離心交替進(jìn)行，分離到大小相近的囊泡顆粒。雖然技術(shù)含量不高，但純度較低。
2:密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，通過密度梯度離心，樣品中的外泌體在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。雖外泌體純度比差速離心高，但步驟繁瑣，耗時。
3:超濾：根據(jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。但是用該方法過濾膜的粘附，可能會損失外泌體，并且過濾時的壓力和剪切力，可能會使外泌體變形受損。
4:免疫分離法：通過抗體包被的微球，特異性結(jié)合外泌體。但是不適合從大量樣本中獲得外泌體。
5:PEG-base沉淀法：通常將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合，在4℃溫育并低速離心。然而該方法可能會同時分離非囊泡污染物（如脂蛋白），同時聚合物材料的混雜可能會影響下游分析。
6:尺寸排阻色譜：填充多孔聚合物微球的柱子，分子根據(jù)其直徑通過微球，半徑小的分子需要更長的時間才能通過色譜柱的孔隙遷移，而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子。但提取太耗時，不適合大量樣本處理。
7:特殊磁珠試劑盒提取法：以磁珠為分離材料的外泌體提取試劑盒。在特定的緩沖體系中， 磁珠吸附外泌體，并被特定的洗脫液（或 PBS /ddH2O）洗脫下來，洗脫后的外泌體不含其它化合物，可直接用于動物體內(nèi)注射。這是目前本人常用方法，省時間，純度高，外泌體回收率達(dá)到 95%以上。