15例臨床試驗結果證實：干細胞治療糖尿病腎病效果顯著

臨床上迫切需要找到一種治療DN安全有效的新方法，因此，福州總醫院干細胞治療科采用經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植臍帶間充質干細胞（UCMSC）治療DN患者，觀察其臨床療效和安全性。

本次研究選用經胰背動脈、雙腎動脈介入移植UCMSC，考慮UCMSC在胰腺內可分化為胰島細胞，從而提升患者胰島細胞數量及改善胰島細胞功能，增加胰島素分泌量，從而緩解DN患者的臨床癥狀，以及UCMSC在腎臟可分化為多種腎臟細胞，從而改善患者腎功能。

研究通過監測實驗組與對照組2組患者治療前及治療后3個月的血壓、血糖、C肽值以及腎功能指標的變化情況，來分析比較2組患者的治療效果，評價經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC對治療DN的臨床療效。

資料與方法

一、病例選擇

實驗組：干細胞治療科收治的15例DN患者，男8例，女7例；年齡（46.40±8.91）歲，病程（5.40±1.92）年；對照組：腎內科收治的15例DN患者，男8例，女7例；年齡（46.6±7.89）歲，病程（5.53±1.41）年。兩組患者在性別、年齡、病程等方面差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

兩組入選患者均為臨床期DN患者，其診斷標準為：持續性蛋白尿（24h尿蛋白定量>0.5g，且連續2次），并排除其他可能引起尿蛋白增加的原因；腎功能進行性下降，可伴有糖尿病視網膜病變、水腫、高血壓等其他糖尿病的慢性合并癥。

兩組患者均排除合并惡性腫瘤、全身感染、局部嚴重感染、結核感染及心、肺、肝等重要臟器的功能障礙者等，對治療及實驗方案知情同意，并且通過醫院倫理委員會批推。

二、方法

(一)? UCMSC制備???用于治療DN的UCMSC均由福州總醫院福建省移植生物重點實驗室自行制備。產婦知情同意，通過倫理委員會批準，獲取足月妊娠的產婦臍帶。分離UCMSC：分離并去除臍帶外膜和血管組織，取臍帶基質，將其剪碎，加入質量分數為0.1%膠原酶IV消化過夜。

離心后，取下層沉淀再用0.25%胰蛋白酶37℃消化1h，過100目篩網，收集含細胞的濾液，離心后計數，接種于低糖DMEM無血清培養基中，置于37℃、5%CO₂培養箱中培養。

移植前所用臍帶干細胞均經過檢測：細胞呈紡錘狀，病原學檢查陰性（包括細菌和真菌等），具有典型的間充質干細胞的免疫表型，內毒素試驗陰性。

(二)??治療方法???兩組患者均持續治療1個月，根據病情需要均給予常規治療：糖尿病飲食，控制蛋白質攝入量，纈沙坦（80mg，口服，每天1次）控制血壓，皮下注射甘精胰島素控制血糖，并且在治療過程中，根據患者實際血圧、血糖情況及時調整纈沙坦、甘精胰島素用量。實驗組患者在常規治療的基礎上加用經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC進行治療。

(三)??實驗組患者經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC???每周1次，共4次。第1次行導管介入經胰背動脈、雙腎動脈移植UCMSC。術前用藥：仙特敏、非那根針、安定注射液。經右側股動脈穿刺，置入穿刺鞘，肝素生理鹽水間斷推注抗凝，置入動脈造影導管至腹腔干，打入造影劑，保存造影圖像。

定位胰背動脈，用5F導管置入胰背動脈，行造影，保存圖像，確認該血管正確無誤。20min內將UCMSC懸液40m1（細胞數：體質量kg×10⁶個）輸注完畢，輸注過程中不斷檢查導管位置，保證導管不從動脈中脫出。之后行雙腎動脈介入術，分別定位左右腎動脈，定位退出導管，用5F導管先后置入左、右腎動脈，行造影，保存圖像，確認該血管無誤，左右各20min內將UCMSC懸液40m1（細胞數：體質量kg×10⁶個）輸注完畢，輸注過程中不斷檢查導管位置，保證導管不從動脈中脫出。

術畢拔出穿刺鞘，局部壓迫止血15min后，加壓包扎，患者平臥，穿刺肢體制動24h。第2~4次UCMSC經外周靜脈途徑輸入移植，每次均輸注UCMSC懸液50m1（細胞數：體質量kg×10⁶個），UCMSC移植后均給予心電監護及其他對癥支持治療。

三、療效評價指標

于治療前及治療后3個月監測患者收縮壓、舒張壓、空腹血糖、餐后2h血糖、空腹C肽，餐后2h C肽以及腎功能指標，如尿素氮、血清肌酐、24h尿白蛋白定量。

四、統計學分析方法

運用R（Version3.2.2）統計軟件，收縮壓、舒張壓、空腹血糖、餐后2h血糖、空腹C肽、餐后2h C肽、尿素氮、血清肌酐、24h尿白蛋白定量計量資料以`x?±?s表示，采用配對樣本t檢驗分別對實驗組治療前、后及對照組治療前、后各項指標的差異進行統計分析比較，采用兩獨立樣本t檢驗對實驗組、對照組治療前、后各項指標的差值進行統計分析比較，以P為差異有統計學意義。

結果

一、療效評估???經治療后，兩組患者的收縮壓、舒張壓、空腹血糖、餐后2h血糖、尿素氮、血清肌酐、24h尿白蛋白定量均較治療前下降，空腹C肽、餐后2h C肽值均較治療前升高，差異均有統計學意義（P，表1、2）。

對兩組患者治療前及指療后3個月的各項指標差值進行比較，在舒張壓、尿素氮、血清肌酐、24h尿白蛋白定量這4個指標方面，實驗組患者下降程度較對照組明顯，差異有統計學意義（P，表3、4）；在收縮壓、空腹血糖、餐后2h血糖、空腹C肽、餐后2h C肽這5個指標方面，差異無統計學意義（P>0.05，表3）。

二、安全性分析???經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC后，患者出現穿刺點滲血1例、乏力癥狀2例、低熱（體溫36.9℃）1例，給予對癥處理后可完全緩解。

討論

DN是糖尿病常見的微血管并發癥，是糖尿病終末期主要死亡原因之一。

其發病機制包括：(1)氧化應激損傷；(2)晚期糖基化終產物的堆積；(3)慢性炎癥反應，(4)腎素–血管緊張素系統的改變。

DN組織學改變包括腎小球硬化、腎小管間質纖維化、小動脈玻璃樣變等。目前DN常規治療的效果欠佳，只起到延緩病情發展的作用。

UCMSC是存在于新生兒臍帶組織中的多功能干細胞，在特定的條件下可誘導分化為破骨樣細胞、心肌細胞和神經元樣細胞等。

UCMSC生物學特性有以下幾點：(1)多能性或全能性：(2)自我更新能力：(3)高度增殖能力；(4)免疫二元性，可以抑制不同物種間的免疫排斥反應，同時對同種異體屏障具有免疫耐受性。因其具有良好的多向分化潛能和活躍的增殖特性，因此，UCMSC移植為DN的治療提供了一種新方法。

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本次實驗結果提示：經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC治療DN，與單純控制血圧、血糖等常規治療DN的方法均能有效控制患者血壓、血糖以及改善患者腎功能。

但經胰背動脈、雙腎動脈介入及外周靜脈移植UCMSC治療DN，在控制好舒張壓、尿素氮、血清肌酐和24h尿白蛋白定量方面，其療效優于單純控制血壓、血糖等常規治療方法，尤其在改善患者腎管功能方面效果顯著；其作用機制可能為UCMSC移植后。

在體內分化為胰島細胞或促進胰腺內源性胰島細胞再生，同時UCMSC可以分化為多種腎臟細胞，包括系膜細胞、內皮細胞、上皮細胞，促進腎臟結構和功能恢復，UCMSC也可通過旁分泌/內分泌營養性生長因子，調節免疫反應，最終促進腎臟修復，從而顯著改善患者腎功能。

治療后兩組的空腹和餐后2h血糖比較，實驗組雖低于對照組，但無統計學意義；治療后兩組的空腹和餐后2hC肽值比較，實驗組雖高于對照組，但無統計學意義，可能與胰島細胞的誘導分化和成熟比較緩慢而觀察時間尚短有關。

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與傳統的治療方法相比，UCMSC移植治療DN是一種新型且有效的治療方法，能顯著改善患者腎功能和延緩糖尿病慢性并發癥的進展，從而提高患者的生活質量，具有廣闊的應用前景。