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?“你有權保持沉默，但你提供的數據照片都將成為呈堂證供。”

從目前一些已經發表的專業文章的數據（包括圖片）來看，國外間充質干細胞（MSC）的生產制備工藝明顯落后于國外的科研水平，主要表現在四個方面：①MSC的細胞表型不符合MSC的定義標準，②經過培養的MSC出現明顯的衰老特征，③制備的MSC注射液的細胞活率低于90%，④制備的MSC注射液的質量欠佳。本小編根據平常碰到的一些文獻摘錄，做個整理，給大家展示出來。

1，MSC的細胞表型不符合MSC的定義標準

先來看看MSC的最低定義標準（注意這是最低標準）：

雖然目前通用的MSC定義標準沒有強制性，但是暫時還沒有更好的指標來定義MSC，所以大部分研究者還是習慣采用該通用標準。

2006年的一篇文章發現低水平的IFN-γ能提高MSC的MHC-II表達，但隨著IFN-γ水平的增加，MSC的MHC-II表達逐漸減少^[1]。但是通過文章的數據分析發現，這篇文章所實驗用到的骨髓MSC，正常培養下，MSC就高表達MHC-II分子（估計至少80%-90%），那么，這些細胞已經不是MSC了，MSC本身是低表達MHC-II分子的（不超過2%的HLA-DR）。很奇怪的是，這篇文章能夠得以發表，而且不少專家還認可這篇文章的數據和結論。會不會是這些專家都忘記了MSC的鑒定標準？

有圖有真相：

美國Artecel Sciences的團隊（Jeffrey M. Gimble領銜）培養的P2代人脂肪MSC，其細胞表型的指標中，CD34的表達高達28%（超過2%），而CD105的表達只有36%（不足95%）^[2]。

雖然美國ArtecelSciences的團隊發現在該公司的分離培養體系下，脂肪MSC經過繼續培養擴增，在P4代的時候CD34可以下降到標準范圍，但是CD105（70.5%）依然不符合MSC的標準要求（≥95%）^[3]。

印度StempeuticsResearch Pvt公司培養的骨髓MSC同樣不符合MSC的標準要求，所以這家公司降低了MSC的標準^[4]。

2018年報道了英國Francesco Dazzi教授牽頭的一項22家機構單位參與的調研，重點是調查歐美17個開展MSC治療的機構，調研內容涉及這17家機構的MSC生產質量體系。調查結果發現56%的MSC產品，其MSC細胞表型CD73、CD90、CD105的表達不符合MSC的定義標準（≥95%）；有50%的MSC產品，其CD45的表達不符合MSC的定義標準（≤2%）^[5]。這說明歐盟17個開展MSC治療的機構，至少有50%的MSC產品的細胞純度明顯不夠，雜細胞過多。

2，經過培養的MSC出現明顯的衰老特征

首先，我們需要認識到，人體會衰老，人體內廣泛存在的MSC也會衰老（大自然的規律），體外培養的MSC同樣會衰老（復制性衰老）。

年輕態的MSC的典型特征就是增殖速度快、胞體飽滿、立體感很好、呈明顯的梭形、偽足較少；而衰老的MSC的典型特征就是增殖緩慢甚至停止、胞體寬大扁平，有時還出現胞體顆粒增多或者空泡增多。

當然，不是說胞體越小和細胞增殖速度越快，MSC就越年輕態。MSC培養增殖過程的有絲分裂，需要時間來實現胞體內的所有亞器官和細胞核的復制和分裂，如果增殖過快，很可能造成“催熟”的后果，導致MSC的正常功能下降。有研究顯示，衰老的MSC（胞體寬大），其免疫抑制功能出現明顯的下降^{[6, 7]}。

美國杜蘭大學健康科學中心Prockop教授2001年認為成纖維細胞狀的梭形MSC為快速自我更新型MSC（I型），胞體寬大扁平呈上皮細胞狀的MSC為成熟型MSC（II型）^[8]。后來發現所謂的成熟型MSC（II型MSC）其實就是養老了的衰老MSC。

美國大名鼎鼎的梅奧診所，其神內學科團隊養的脂肪MSC，同樣出現MSC衰老的胞體寬大扁平的細胞形態，完全失去了典型的成纖維細胞樣的梭形^[9]。

越南某實驗室分離培養的人脂肪MSC，雖然細胞表型指標符合MSC的定義要求，但是脂肪MSC培養至P10代時，MSC出現典型的衰老表型，胞體直徑增大和胞體寬大扁平^[10]。

意大利都靈大學MaurizioParola教授團隊所培養的人骨髓MSC，同樣是出現典型的衰老表型，即胞體寬大扁平，胞漿的顆粒增多^[11]。

德國海德堡大學Anthony D.Ho教授在2008年的一篇綜述中使用了幾張MSC染色的照片，從這些照片的MSC形態來看，MSC衰老非常明顯，完全失去了典型的成纖維細胞樣的梭形^[12]。

細胞衰老的檢測指標是衰老相關的β-半乳糖苷酶（SA-βgal），意大利M.Mattioli-Belmonte教授的團隊培養人骨膜來源的MSC，在培養的P3代之時，已經有25%的MSC出現SA-βgal染色陽性（綠色），說明了有25%的MSC是衰老的MSC^[13]。

當然了，國內也有實驗室在培養MSC方面也做的不錯，細胞形態呈典型的成纖維樣梭形，比如下圖所示的血液疾病患者的骨髓MSC。

3，制備的MSC注射液的細胞活率偏低

在文獻中明確提及MSC的細胞活率的情況不多見。根據干細胞制劑的細胞活率，做一個歸納和分組。不少國外的文章提到的細胞活率低于90%，所以別慣性思維地認為國外的干細胞質量就是好。

①細胞活率>70%的公司或者研究團隊有：

美國邁阿密大學Miller醫學院大名鼎鼎的Joshua M Hare教授2009年領銜開展Prochymal（骨髓MSC）治療急性心梗的隨機對照臨床研究，Prochymal（骨髓MSC）的細胞活率大于70%^[14]。同樣不低于70%的細胞活率出現在美國MD安德森癌癥中心的Partow Kebriaei團隊開展的Prochymal（骨髓MSC）治療急性GVHD的臨床研究^[15]。澳大利亞RoyalPerth Hospital生產制備的骨髓MSC治療克隆恩病，MSC注射液的細胞活率同樣只要求大于70%^[16]。

②細胞活率>80%的公司或者研究團隊有：

荷蘭萊登大學醫學中心生產制備的骨髓MSC，意大利Pavia大學的Bernardo教授團隊開展的骨髓MSC治療急性GVHD的臨床研究，骨髓MSC的細胞活率的放行要求是≥80%^[17]。同樣的>80%的細胞活率放行要求的還有韓國medipost公司生產制備的臍血MSC^[18]，印度的Stempeutics Research Pvt公司生產制備的骨髓MSC^[4]，2013年和2015年發表臍帶MSC臨床研究文章的深圳北科公司^{[19, 20]}，智利Cellsfor Cells公司的Cellistem產品（臍帶MSC）^[21]，韓國Phamicell公司生產制備的骨髓MSC^[22]。

③細胞活率>90%的公司或者研究團隊有：

當然了，全球范圍內，還是有一些臨床研究所采用的MSC注射液的細胞活率大于90%。比如有瑞典卡羅林斯卡大學醫院Katarina Le Blanc教授團隊生產制備的骨髓MSC^[23]，比利時列日大學和瑞典烏普薩拉大學生產制備的骨髓MSC（技術和Katarina Le Blanc教授團隊同源）^{[24, 25]}，我國江蘇省干細胞中心（北科生物提供技術）^[26]，日本札幌醫科大學Osamu Honmou教授團隊生產制備的骨髓MSC^[27]。

4，制備的MSC注射液的質量欠佳

2017年一個大規模的MSC驗證實驗，涉及美國的7個GMP制備中心和1個研發中心，每個中心的制備工藝略有不同；對其中六個中心的人骨髓MSC進行骨形成測試，發現不同制備中心的MSC的骨形成的數量出現很明顯的差異，并且只有三個中心的人骨髓MSC支持造血；這些結果表明，美國的7個GMP制備中心和1個研發中心在生產工藝制備的水平出現明顯的差異，這個差異導致了不同的MSC功能強弱有差異，包括它們形成骨骼和支持造血的能力^[28]。當然了，這篇文章的作者們忽視了骨髓MSC供體的個體差異對實驗結果的影響。

瑞典卡羅林斯卡大學醫院分析了691名在該醫院進行造血干細胞移植的患者的肺炎相關死亡情況，多因素分析發現，急性移植物抗宿主病（GVHD）II-IV級、巨細胞病毒（CMV）感染和接受MSC治療是肺炎相關死亡的相關因素，而霉菌感染是造血干細胞移植患者肺炎相關死亡的最常見原因^[29]。

大量的研究證明MSC可以治療肺炎，減輕炎癥和降低死亡率。但是這個赫赫有名的醫院進行MSC治療，竟然是誘導肺炎死亡的高風險因素，所以別太癡迷瑞典卡羅林斯卡大學醫院（諾貝爾生理學或醫學獎的評審機構）的干細胞生產制備工藝水平了。

MSC治療骨髓移植后出現的排異反應（GVHD），45%的患者在輸注MSC后病毒重新激活，而且還觀察到兩例患者可檢查對病毒刺激的免疫應答，并顯示病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞活性^[30]。但是意大利Università degli Studi di Milano Bicocca的這個臨床研究，患者在回輸MSC后的第一天就出現病毒檢測陽性，這就提示MSC注射液很可能被病毒所污染。

荷蘭萊頓大學醫學中心開展自體骨髓MSC治療腎移植后出現排斥反應的臨床研究，6名腎移植患者（移植后4周到6個月）接受2次靜脈MSC注射后，出現了BK病毒和CMV病毒的感染^[31]。這就再一次提示在該中心制備的MSC注射液很可能被病毒所污染，制備工藝和質量檢測不過關。

2020年12月份最新的研究報道是基于15名參與者的小部分樣本，西班牙Instituto de?Biomedicina de Sevilla團隊的1-2期臨床研究結果表明，異體脂肪來源的MSC輸注（1×10⁶/kg，4次）對改善這些免疫不應答的HIV患者的免疫恢復或減少免疫激活或炎癥并不有效；而且有3名受試者發生靜脈血栓事件，與輸液部位的脂肪MSC輸注直接相關^[32]。所以，這里順便勸告想去西班牙回輸MSC的同胞們，別去西班牙打干細胞了，細胞質量很可能不靠譜（4次治療沒效），而且制備工藝也不過關，會引發靜脈血栓。

所以國外干細胞公司的臨床研究結果，不盡人意，那也是正常的事，畢竟都沒養好MSC，就不能期待MSC發揮多好的效果。至今，絕大部分國外的干細胞專家們都沒認識到：MSC臨床治療效果欠佳的主要原因之一是MSC沒養好。

綜上所述，您詳細了解國外干細胞公司的細胞產品質量后，是否還在迷信國外的干細胞質量？

我們國內干細胞公司需要學習和吸取國外的經驗教訓，審視自己培養的MSC細胞形態和注射液質量，對照國外相對落后的MSC培養和制備工藝，有則改之、無則加勉。

估計大部分干細胞公司或者研究機構都不敢隨意地把MSC細胞產品的重要信息放在文章里面了。

我國的干細胞事業，加油！

編輯：小果果，轉載請注明出處：http://www.448371.com/cells/gxb/4303.html

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