間充質干細胞來源的細胞外囊泡的治療潛力 | 德國埃森大學

本文作者Fabiola Nardi Bauer等來自德國埃森大學醫院輸血醫學研究所，原文標題Therapeutic Potential of Mesenchymal Stromal Cell-derived Small Extracellular Vesicles，此前發表在Biomaterials Science上。

細胞外囊泡 (EVs) 是由多種哺乳動物細胞類型分泌的膜囊泡，已被證明在細胞間通訊中發揮重要作用。EVs 的內容，包括蛋白質、microRNAs 和 mRNAs，根據分泌它們的細胞類型而有所不同。

 

因此，研究人員已經證明，源自各種細胞類型的 EV 在生物學現象中發揮著不同的作用。考慮到間充質干細胞 (MSCs) 在體內無處不在，MSC 衍生的 EVs 可能參與廣泛的事件。特別是MSCs 最近因其分泌因子的治療作用而備受關注。因此，MSC 衍生的 EV 可能會提供新的治療方法。

 

小細胞外囊泡 (sEV)?

 

小細胞外囊泡 (sEV) 是尺寸低于 200 nm 的生物納米顆粒，幾乎所有細胞都會釋放并在所有體液中檢測到。以特定細胞類型的方式組裝，至少一部分 sEV 可以將復雜信息從發送到特定選擇的目標細胞。根據它們的起源，信號 sEV 可以調節生理和病理生理過程。

 

例如，從間充質干細胞 (MSCs) 釋放的 sEV 在越來越多的不同疾病中介導治療活性。盡管它們的具體作用機制 (MoA) 以及它們的作用部位 (SoA) 尚未得到充分剖析，但 MSC-sEV 顯然以多模式方式發揮作用。

 

有證據表明，作為其治療活動的一部分，MSC-sEV 制劑可以將免疫（促炎性免疫反應）調節為調節性/耐受性免疫反應，促進血管生成和促再生過程，并以抗凋亡方式作為以及恢復功能。在這里，作者總結了發現 MSC-sEV 治療活性背后的歷史、它們的一些治療應用領域以及與它們有效轉化為臨床相關的挑戰。

 

1.1 再生醫學的概念

 

退行性疾病通常與不可逆的組織損失有關。在這種情況下，人們普遍認為，通常控制組織穩態的內源性干細胞和祖細胞的潛力不足以促進組織再生。因此，具有與內源性干細胞相當的發育潛力的干細胞和/或祖細胞已被應用于不同的臨床前模型以及患有退行性疾病的各種不同的患者群體。

 

在 2000 年代初期，隨著對干細胞生物學的發展呈指數增長，許多觀察結果表明體干細胞具有可塑性，即體干細胞產生遠遠超出其正常發育途徑的分化細胞的能力。

 

例如，觀察結果表明，在適當的外部條件下，未成熟的腦細胞可以產生血細胞，反之亦然。間充質干細胞 (MSC) 尤其成為一個有吸引力的研究對象。MSC 樣成纖維細胞最初是由 Friedenstein 及其同事在 1960 年代后期描述的。

 

這些成纖維細胞樣細胞最初是從成人骨髓中生長出來的，可以很容易地擴展為塑料貼壁細胞。在分化試驗中，它們可以向成骨、脂肪和軟骨細胞譜系發展，這些譜系都是中胚層衍生物，從而發揮了間充質干細胞的潛力，而間充質干細胞的存在是以前預測的。

 

很快，MSCs 可以從各種組織中培養出來。類型包括脂肪、臍帶、臍帶血和胎盤組織。此外，一些 MSC 類型，包括中胚層成體祖細胞 (MAPC) 和非限制性成體干細胞 (USSCs) 以體干細胞的形式出現，其胚層跨越發育潛力可與多能胚胎干 (ES) 細胞相媲美。

 

然而，與 ES 細胞相比，MSC 細胞沒有顯示出致畸潛能，并很快被認為是退行性疾病的治療劑。身體并受環境因素的引導，成為受影響組織的家園并分化以取代丟失的細胞類型。

 

由于 MSC 還分別產生了模擬神經元或心肌細胞特征的細胞，它們很快被討論為用于急性疾病（如缺血性中風和心肌梗塞）的同種異體現成產品。因此，研究小組開始研究它們與同種異體免疫細胞的相互作用。雖然最初假設 MSC 原則上會被拒絕，但它們被證明可以調節不同類型免疫細胞的活性。

 

具體來說，不需要直接的細胞間接觸，它們被發現可逆地抑制受刺激的 CD4 和 CD8 T 細胞的增殖 12-15 并促進調節性 T 細胞的產生、募集和調節。MSCs 還有效抑制B 細胞和單核細胞衍生的樹突狀細胞的分化。

 

此外，MSCs 抑制 IL-2 誘導的 NK 細胞的增殖并阻止 NK 細胞活化，下調 NKp30 和 NKG2D 受體。因此，MSCs 抑制各種類型的免疫效應反應和促進調節性免疫細胞功能。結合這些功能，它們分泌許多不同的可溶性因子，包括已知可調節免疫反應的細胞因子，如轉化生長因子 β1 (TGF-β1)、肝細胞生長因子 (HGF)、色氨酸降解酶吲哚胺 2, 3-雙加氧酶 ( IDO)、前列腺素 E2 (PGE2) 和人類白細胞抗原 (HLA) I 類分子 G (HLA-G)。

 

因此，除了它們在退行性疾病治療中假定的細胞替代潛力外，MSCs作為炎癥性疾病的治療劑，特別是急性移植物抗宿主病（aGvHD）的治療劑越來越多地被討論。

 

急性 GvHD 是由同種異體免疫細胞作為同種異體造血干細胞 (alloSC) 移植到清髓患者的一部分而觸發的。需要聯合移植包括 T 細胞在內的免疫細胞，以在 alloSC 移植前消除未通過清髓治療方案根除的殘留腫瘤（白血病）細胞。

 

因此，alloSC 移植提供了一種聯合的再生和免疫治療方法。盡管該療法可以治愈，但高達 50% 的接受 alloSC 移植的患者會發展為輕度至重度的 aGvHD；嚴重的形式與高死亡率相關。

 

一線 aGvHD 患者接受類固醇治療，這種類固醇是淋巴溶解的，可以成功抑制大約一半 aGvHD 患者的疾病誘導 T 細胞功能。對于其余的類固醇難治性 aGvHD 患者，到目前為止，尚未批準二線治療。

 

MSCs 已經并且仍然被認為是類固醇難治性 aGvHD 患者的潛在二線治療劑。事實上，在 2004 年，Katarina Le Blanc 和她的團隊成功地用同種異體 MSC 治療了一名 9 歲的類固醇難治性 aGvHD 患者。

 

從那時起，美國國立衛生研究院 (NIH) 已經注冊了 1200 多項臨床 MSC 試驗，其中大多數打算將 MSC 作為再生或免疫治療劑應用于不同的患者群體 (clinicaltrials.gov)。

 

從 2006 年到 2009 年，進行了第一個 3 期臨床試驗（NCT00366145；[Remestemcel-1]）以評估人 MSCs 作為類固醇難治性 aGvHD 的二線治療的療效。盡管報告了 Remestemcel-l 的安全性，但在 Remestemcel-l 組和安慰劑組中，超過 28 天的總體反應率是相當的。

 

然而，對兒科 aGvHD 患者或具有高 aGvHD 風險的患者的臨床研究顯示，MSC 的結果更好-治療組比安慰劑治療組。因此，已經進行了一項單臂和前瞻性的 3 期臨床研究 (NCT02336230)，以治療類固醇難治性兒科患者的 Remestemcel-l。

 

MSC 產品的劑量為 2 × 10E6 個細胞 kg-1 體重，并在 4 周內每周兩次施用。在 MSC 治療組中，74% 的患者在第 28 天后表現出改善。相比之下，在對照組中，只有 45% 的患者的 aGvHD 癥狀在第 28 天后得到改善。總體反應改善在很大比例下得以持續在第 180天后確認改善的患者中，不過，除了日本以外，日本已獲得商業 MSC 產品 (TEMCELL) 用于 aGVHD 治療的許可，并有條件地臨床批準使用另一種商業 MSC 產品 Prochymal 治療兒科 aGvHD。

 

1.2 MSCs 以旁分泌而非細胞方式發揮作用

 

從觀察到 MSCs 可以在沒有物理細胞間接觸的情況下介導 T 細胞增殖的抑制，再加上它們分泌各種細胞因子的事實，多年來很明顯，MSCs 通過其分泌組發揮其治療功能的比例，在促再生和免疫治療方法中。

 

最初，調查細胞是否需要移植到受影響的組織以實現其治療效果的研究表明，在大多數情況下，全身給藥的 MSCs 最終進入治療動物的肺部，并且很少在其假定的靶組織中大量回收。

 

例如，Darwin Prockop 小組證明，靜脈注射人 MSCs 可改善小鼠心肌梗塞后的心臟功能。具體來說，應用的 MSCs 減少了炎癥反應，減少了梗死面積并改善了心臟功能。

 

在通過篩選動物探索施用的人類 MSCs 的生物分布后，人類 DNA 幾乎完全在動物的肺中檢測到，而在其他組織中僅少量檢測到。此外，被困在肺中的 MSC 顯示出分泌 TNF-α 誘導的蛋白 6（TNAIP6 或 TSG-6），一種抗炎細胞因子。

 

隨后將重組 TSG-6 施用于梗塞小鼠的實驗證實，施用 TSG-6 可降低心肌梗塞誘導的炎癥反應并減少梗塞面積。支持 TSG-6 的重要作用，siRNA 介導的 TSG-6 表達敲低后的人類 MSC 未能改善心肌梗塞的大小。

 

相比之下，發現 MSC 給藥可改善誘導的急性腎損傷，而無需大量移植到受影響的器官中。應用的 MSCs 的再生作用與胰島素樣生長因子-1 (IGF-1) 的分泌有關。經基因改造以沉默 IGF-1 表達的 MSCs 限制了 MSCs 的促再生作用。因此，很明顯，與最初的假設相反，MSCs 幾乎不歸巢于受影響的器官和組織以取代丟失的細胞類型，而是通過它們改善臨床癥狀分泌組。

 

由于這些和相關觀察，最初提出的 MSCs 的干細胞相關特征受到質疑。因此，MSCs 目前優選定義為“間充質基質細胞”而不是“間充質干細胞”。最近，MSC 先驅之一阿諾德·卡普蘭（Arnold Caplan）建議根據其旁分泌作用機制更準確地將它們定義為“醫學信號細胞”。不管縮寫“MSC”最終的首選定義是什么，它都有成為確定發揮 MSCs 促再生/免疫調節活性的活性成分的主要目標。

 

1.3 MSC-EVs 通過細胞外囊泡介導其治療作用

 

考慮到旁分泌活動介導 MSCs 的治療效果，許多研究探索了 MSC 衍生的條件培養基 (CM) 的治療效果。事實上，MSC-CM 在不同的小鼠心肌梗塞模型中顯示出介導心臟保護作用。

 

科學家Gnecchi 及其同事證明，經過改造以表達高 Akt 水平的 MSC 的 CM 可促進心肌組織修復和功能改善。調查由 Timmers 及其同事進行，他們通過過濾對 MSC-CM 進行了分級，并發現只有未分級的 MSC-CM 和未通過 1000 kDa 過濾器的部分含有心臟保護活性，特別是減少梗塞面積和改善心臟收縮和舒張的活性。隨后，作者通過透射電子顯微鏡證明了這些部分中存在大小為 55-65 nm 的泡狀顆粒。同時，證實存在外泌體標記蛋白，即 CD9、CD81 和 Alix。因此，作者將囊泡顆粒稱為外泌體。

 

與心肌梗塞模型中的效果相似，Bruno 及其同事觀察到，通過離心分離人骨髓來源的 MSC-CM 后，活性在超速離心顆粒中恢復。該部分的透射電子顯微鏡表征顯示存在大小從 80 nm 到 1 μm（平均 135 nm）的囊泡顆粒，作者將其破譯為微泡。

 

與 MSC 本身相比，含有囊泡的部分是能夠在體外降低細胞凋亡率并增加腎小管上皮細胞的增殖。在體內，MSCs 和由 MSC-CMs 制備的富含微泡的級分在嚴重聯合免疫缺陷 (SCID) 小鼠中對甘油誘導的急性腎損傷 (AKI) 的功能和形態恢復顯示出相當的功效。Sai Kiang Lim 和 Dominique de Kleijn 小組以及 Giovanni Camussi 小組的這些開創性研究相互補充，首次暗示小細胞外囊泡 (sEVs) 發揮 MSCs 的治療作用（圖 1.1）。

圖 1.1 MSC 通過它們的 EV 發揮作用，這些 EV 可以從 MSC 條件培養基中收獲。與 MSC 一樣，制備的 MSC-EV 可抑制疾病相關過程并以多模式方式促進再生。

 

1.4 MSC-sEVs 改善許多不同疾病模型中的疾病癥狀

 

由 MSC-CM 制備的 MSC-sEV 與其親本 MSC 一樣具有治療效力，這一發現為新型無細胞療法提供了新的視角。與細胞療法相比，基于 sEV 的療法提供了幾個假設的優勢，例如EV 缺乏自我復制潛力，這在細胞療法中可能導致腫瘤形成。重要的是，由于它們的尺寸小，在 sEV 制劑中小于 200 nm，sEV 產品可以通過過濾進行滅菌。此外，整體處理和儲存不如細胞復雜。

 

最終，sEV 產品也可以由不能用于臨床應用的永生化細胞系細胞生產。因此，sEV 的生產可能會擴展到工業水平，這對于細胞療法來說是不可能的。盡管如此，仍有一些問題需要解決；除其他外，sEV 療法需要與細胞療法一樣有效。

 

為此，研究人員使用缺血性中風的小鼠模型證實，在該模型中，系統性施用的 MSC-sEV 制劑也可將中風后癥狀改善到與其親代細胞相當的程度。兩者都通過促進神經發生和血管生成來誘導神經功能恢復。

 

此外，還分析了施用 MSC-sEV 制劑對外周血成分的影響。值得注意的是，與人類一樣，缺血性中風在缺血性中風小鼠中誘導白細胞減少，殘留的 T 細胞顯示出活化的表型，指出有助于免疫調節作用，在用 MSC-sEV 制劑治療的缺血性中風小鼠中，白細胞減少的程度降低了并且 T 細胞的活化表型受到抑制。

 

在一項正在進行的研究中表明，MSC-sEV 制劑的施用也減少了中性粒細胞和其他白細胞向缺血性病變部位的侵襲。值得注意的是，中性粒細胞耗竭導致與 MSC-sEV 制劑的給藥相當的改善，并且還抑制了其他白細胞侵入梗塞區域。

 

事實上，在中性粒細胞耗竭的缺血性腦卒中給予 MSC-sEV 制劑時沒有觀察到額外的益處中風小鼠意味著 MSC-sEV 至少通過調節中風后動物的中性粒細胞發揮其治療作用的很大一部分。目前，這些作用是直接還是間接發揮仍然是一個懸而未決的問題。

 

MSCs 及其 EVs 的逐點比較也在大鼠脊髓挫傷模型中進行。兩者都被證明在減少受傷后長達 2 周的神經炎癥水平方面同樣有效。此外，在脊髓損傷后立即給予 MSC-sEV 制劑可降低繼發性損傷早期脊髓實質中促炎細胞因子的表達。

 

除了這些逐點比較之外，MSC-sEV 的治療潛力已在越來越多的不同臨床前模型中獲得批準。例如，在神經系統中，在大鼠缺血性中風模型、坐骨神經再生小鼠模型、脊髓損傷大鼠和恒河猴皮質損傷模型中也觀察到了施用 MSC-sEV 制劑的積極作用。

 

其他研究人員觀察到施用 MSC-sEV 制劑對新生兒腦損傷的治療效果。此外，在新生兒環境中，MSC-EVs 對新生兒肺損傷的有益作用被描述。治療效果MSC-sEV 制劑在急性和慢性腎損傷模型上的研究被多個小組研究；MSC-EV 研究的早期階段已經報道了積極的影響。

 

MSC-sEV 給藥可以改善其他器官損傷，包括肝臟、成人肺和肌肉損傷模型。此外，MSC- sEV 制劑被發現可促進嚴重肢體缺血大鼠模型的血流、皮膚燒傷愈合和同種異體皮膚移植物的存活。最近，局部應用的 MSC-sEV 制劑被證明可以減輕噪音引起的毛細胞損失，部分緩解恢復聽力損失。還有許多其他應用程序，我們很抱歉只提到一小部分，并且只引用了一小部分，尤其是最近發表的研究。

 

1.5 MSC-sEVs已成功應用于患者

 

再加上有希望的臨床前數據，MSC-sEV 也越來越多地被考慮用于人類的治療應用。起初，MSC-sEV 被用于對患有難治性 aGvHD 的患者進行個體化治療。在 2 周的時間里，MSC-sEV 被證實可以在體外調節患者免疫細胞的促炎反應，并以 2 天或 3 天的間隔進行靜脈內輸注。MSC-sEV 治療顯著改善了 GvHD 癥狀，使患者穩定超過 4 個月。

 

在埃及進行的一項隨機安慰劑對照臨床試驗中，40 名入組的慢性腎病 (CKD) III 期和 IV 期患者被分為兩組。第一組患者接受兩劑 MSC-sEV 制劑，而安慰劑組則靜脈注射生理鹽水。通過估計的腎小球濾過率 (eGFR)、尿白蛋白肌酐比、血尿素和血清肌酐水平評估腎功能。通過測定血液中 TNF-α、TGF-β1 和 IL-10 的水平來評估炎癥免疫活性。與安慰劑組相比，MSC-sEV 治療組表現出改善的 CKD 癥狀，這反映在肌酐清除率上。這種改善伴隨著 MSC-sEV 治療患者血漿中 TGF-β1 和 IL-10 濃度的顯著增加以及 TNF-α 水平的顯著下降。

 

在這兩種情況下，都觀察到了有希望的治療效果，沒有報告或觀察到副作用。最近，骨髓來源的 MSC-sEV 制劑被應用于 24 名 COVID-19 患者，沒有顯示出任何副作用。不幸的是，作者沒有報告有關他們的 MSC-sEV 產品的詳細信息，對于結果仍有太多問題懸而未決。

 

1.6 MSC-EV 產品的免疫調節活性

 

顯然，MSC-sEVs 可以通過不同的機制來改善各自疾病的癥狀。它們的確切作用機制 (MoA) 尚不清楚。然而，它們調節免疫反應和將免疫系統從急性炎癥狀態轉變為調節狀態（即從防御轉變為耐受）的能力似乎是它們的關鍵功能之一。

 

其中，MSC 的抑制作用- 已在體外報道了 DCs 上的 EV。MSC-EV 添加到人單核細胞衍生的 DC 可降低 DC 成熟和激活標志物 CD83、CD38 和 CD80 的表達，減少促炎細胞因子 IL-6 和 IL-12p70 的分泌，并增加抗炎細胞因子 TGF- β。

 

同樣在體外，將 MSC-sEV 添加到經典激活的 (M1) 骨髓衍生巨噬細胞中顯著降低了促炎 M1 標志物的 mRNA 水平，例如 CCL5、IL-6 和 TNF-α。值得注意的是，MSC-sEVs 還可以調節已經 M2 極化的巨噬細胞。例如，它們顯著抑制了 Resistin 樣 α 和 CD206 的誘導并增強了 M2 衍生的精氨酸酶 1 (Arg1) 表達水平。

 

MSC-sEV 對巨噬細胞極化對 M2 免疫調節表型的影響也已在脊髓動物模型中得到證實損傷和腎損傷。在急性腎損傷模型中，MSC-EV 治療通過增加抗炎細胞因子和減少巨噬細胞和淋巴細胞的局部侵襲而顯示出免疫調節作用。事實上，MSC-sEV 的免疫調節特征現在已經在幾種疾病模型中描述，這意味著免疫調節是擬議的 EV 介導的 MoA 的重要組成部分，有助于 MSC-sEV 的促再生作用。

 

再加上觀察到 MSC-sEV 制劑在許多疾病模型（包括 ARDS 和敗血癥）中調節免疫反應，我們認為 MSC-sEV 療法確實可能是 COVID-19 患者的有效治療選擇。

 

然而，再加上耐受性誘導在 GvHD 和其他無菌、非病毒誘導的疾病中似乎是有益的，但需要考慮在存在復制病原體的情況下的嚴重不良反應。假設，病毒和細菌可以在耐受性環境中以無法控制的方式傳播。

 

盡管已經報道了 MSCs 及其分泌蛋白組的抗菌活性以及 MSC-EV 抗流感活性，但研究人員仍然保持謹慎，并將此問題視為在應用 MSC-sEV 產品之前應仔細解決的幾個問題之一對疾病促進、復制病原體的患者。

 

1.7 MSC-EV產品介導的其他活動

 

除了它們的免疫調節特性外，MSC-EVs 還誘導最終促進成功組織再生所需的其他促再生過程。例如，MSC-EVs 已在機制上被證明可以增加受損細胞中的 ATP 水平，降低氧化應激和細胞損傷的嚴重程度，并恢復細胞代謝活動。

 

此外，MSC-sEV 制劑具有促血管生成活性。在我們前面提到的在缺血性中風模型中，應用的 MSCs 和 MSC-sEVs 都通過增加神經祖細胞的存活率來促進神經發生，從而在缺血 4 周后導致更高的神經元密度。

 

同樣，促進了產生新內皮細胞的血管生成過程。因此，MSC-EV 給藥增加了內源性神經生成和血管生成。與作者的研究一致，在大鼠創傷性腦損傷模型中，MSC-sEV 制劑給藥后的功能恢復與血管生成促進活性相關。促血管生成潛力也在被設計為過度表達 CXCR4 的 MSCs 的 EV 制劑中恢復。

 

在心肌梗死模型中，MSC-EV 給藥導致心肌細胞中 VEGF、IGF-1α 和 pAkt 的上調和 caspase-3 的下調。此外，血管形成增強。同樣在腎損傷模型中，MSC-sEV 治療被發現除了內源性腎細胞的擴增外，還能促進血管生成。

 

總之，MSC-EV 顯然是以多模塊方式運行的。到目前為止，主要研究了它們的免疫調節和促血管生成過程。然而，它們也可能發揮抗凋亡作用、恢復能量并實現我們可能尚未意識到的其他一些功能。

 

由于在 MSC 領域觀察到的異質性，不太可能所有機制在所有不同的目標疾病中都同等重要。似乎更合理的是，根據目標疾病需要不同的功能模式。此外，MSC 不是統一的細胞類型。它們有一些共同特征，但在表型和功能上也可能不同。MSC 和 MSC-EV 異質性將在下一段中更詳細地討論。

 

1.8 MSC-sEV 制劑的異質性

 

將 MSC-sEV 轉化為臨床的一個重要考慮因素是，單個 MSC-sEV 制劑的治療潛力可能因獨立制劑而異。MSCs 已經被認為是一種異構的細胞實體。無論來源如何，來自特定來源的 MSC 在大小和真正 MSC 標記蛋白的表達水平上可能不同。

 

根據作者自己的經驗，我們觀察到基質 MSC 功能的組織特異性和個體差異，即他們支持原始造血細胞。雖然我們假設存在不同的 MSC 亞型，它們的治療潛力很可能不同，但我們不知道有任何公認的區分不同 MSC 亞型的標準。

 

然而，在從不同供體的骨髓來源的 MSC 甚至是同一供體的獨立擴增的 MSC 生產 sEV 后，我們可重復地觀察到獲得的 MSC-sEV 產品的體內和體外免疫調節能力的分子變化和功能差異.具體而言，在比較獨立 MSC-sEV 制劑的細胞因子含量后，我們監測了促炎和抗炎細胞因子濃度的差異。

 

在功能水平上，作者最近發現獨立的 MSC-sEV 制劑具有許多關于它們的 sEV 含量在體外和體內仍然不同且可重復地調節 T 細胞活性。最近，我們研究了它們在多供體混合淋巴細胞反應 (mdMLR) 測定中調節免疫反應的功能特性以及它們抑制優化的 aGvHD 小鼠模型中的 aGvHD 癥狀。

 

值得注意的是，具有體外免疫調節能力的 MSC-sEV 制劑也能夠在體內調節 aGvHD 癥狀。然而，一部分樣本未能在兩種檢測中顯示出功效。相比之下，在沒有將體內結果與 mdMLR 檢測結果相關聯的情況下，我們還觀察到獨立的 MSC-sEV 制劑提供了不同的調節缺血性中風癥狀的能力model.51

 

因此，在我們手中，相關比例的獨立 MSC-sEV 制劑未能在各種動物模型中介導治療效果。在發現可靠的替代標志物并對其進行鑒定之前，我們認為必須對治療性 MSC-EV 制劑進行功能測試，最好是在已被鑒定為效力測定的測定中。值得注意的是，效力測定必須滿足監管機構接受的若干要求，而不僅僅是提供有關治療劑效力信息的功能測定。

 

除了我們的 MSC-sEV 產品效力的可變性外，其他 MSC-sEV 產品的效力可能取決于親本 MSCs 的來源。我們還不知道除骨髓以外的任何其他來源的 MSCs 是否可以提供加速的治療活性，甚至不知道除 MSCs 之外的其他細胞類型是否會釋放更有效的 EV。當然，細胞固有特性決定了 sEV 產品的治療效力，而且從細胞培養條件開始的生產過程通過 CM 收獲程序和下游加工方法的間隔肯定會影響所得 sEV 產品的效力。

由于此討論超出了本章的范圍，我們希望參考解決這些問題的白皮書。除了這些白皮書中提出的建議之外，我們想向任何打算通過實驗接近治療性 EV 領域的人推薦還要研究和考慮國際細胞外囊泡協會 (ISEV) 的更一般性建議。盡管指南寫得很好，但它們很濃縮，可能會讓 EV 小說家不知所措。因此，我們強烈建議任何打算通過實驗進入細胞外囊泡領域的人與該領域的專家聯系。為了促進 EV 研究和支持 EV 小說家，除了 ISEV 之外，還成立了許多國家 EV 協會。例如，德國細胞外囊泡協會（GSEV）成立于 2017 年。

 

1.9 關鍵信息

 

細胞外囊泡目前是一個熱門話題，為生命科學領域提供了許多有希望的方面。各種細胞類型的 sEV，尤其是 MSC，似乎通過調節各種疾病的免疫系統來介導促再生作用。臨床前數據，輔以在人類中的一些應用，預測了巨大的治療潛力。然而，細胞外囊泡領域還很年輕，我們必須應對幾個挑戰才能將細胞外囊泡準確地轉化為常規診所。許多這些挑戰，包括異質性問題，最近已在 ISCT 和 ISEV 的立場文件中在 COVID-19 患者的 MSCs-EV 治療的背景下進行了討論，但也與所有其他臨床 sMSC-EV 應用相關。