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敲黑板啦，IF=31.373組織外泌體研究模板來了！




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外泌體應用                                                                        ?
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間充質干細胞、免疫細胞、外泌體源頭實驗室




南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院內分泌科畢艷教授團隊和南京大學生命科學學院張辰宇、李靚教授團隊合作，首次發(fā)現(xiàn)外泌體可介導脂肪-大腦間通訊并促進糖尿病認知功能障礙的發(fā)生。研究成果發(fā)表在國際著名期刊《Cell Metabolism》上。


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研究背景：


糖尿病顯著增加認知障礙的發(fā)生風險，嚴重影響老年人健康生存狀態(tài)。臨床研究表明控制血糖不能保護認知功能，因此需要進一步揭示糖尿病認知功能障礙的機制，尋找治療糖尿病認知障礙的新策略。脂肪組織外泌體作為新型脂肪因子，可參與脂肪組織與其他外周組織器官間的生物信號傳遞以及代謝調控，但能否介導脂肪組織與大腦信息交流的發(fā)生尚不明確。




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研究結果：


作者利用脂肪移植和多種外泌體示蹤技術，發(fā)現(xiàn)肝臟來源的細胞外囊泡（EVs）不能介導外周組織和大腦間通訊，而脂肪組織來源的EVs是形成二者通訊的重要生物學介質；在胰島素抵抗及糖尿病狀態(tài)下，脂肪組織EVs攜帶的內容物miRNAs促進海馬突觸丟失和認知功能損傷。研究團隊進一步利用小RNA測序和轉錄組測序技術，識別了脂肪組織來源的EVs中造成糖尿病認知功能損傷的系列關鍵分子，發(fā)現(xiàn)人和小鼠共有的致病分子miR-9-3p 通過靶向下調對神經突觸功能維持至關重要的分子BDNF，造成神經突觸丟失，進而促進認知功能損傷。最后該團隊利用病毒介導的基因沉默技術，證實靶向脂肪組織衍生的 EVs 或其內容物miRNAs可顯著減緩糖尿病認知功能障礙。


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研究結論：


本研究揭示了脂肪組織-大腦器官間通訊機制，闡明了脂肪組織衍生的細胞外囊泡及其內容物miRNAs在糖尿病認知功能障礙發(fā)生中的重要作用，為糖尿病認知障礙的藥物干預靶點提供了新思路。


原文：掃碼下載


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組織外泌體研究意義：


 組織外泌體（tissue-derived EVs)，指由多種細胞分泌的存在于組織間隙中的外泌體。直接從組織中分離的EVs具有組織特異性、準確反映組織微環(huán)境等優(yōu)點。




組織外泌體如何提取？




常見問題及解決方法：


一、 產品試劑保存問題：


1. Solution A2使用前后應保存于-18℃條件下，建議分裝后使用，應避免反復凍融；


2. Solution B2始終保存在室溫條件下即可，溫度過低可能使該溶液中出現(xiàn)白色結晶，且難以復溶（需要高溫），少量沉淀不影響提取效果。


二、 純化柱使用問題：


1. 一般情況下，每個樣品按照說明書操作，“3000×g（~6000 rpm）離心10 min”即可一次性純化完畢。如果上柱中仍有液體殘留，將純化柱轉換方向放置于離心機中（區(qū)別于上一次放置方向即可），再次重復離心；


2. 若通過上述操作，上柱中仍有較多液體殘留，請將上柱中的液體轉移至新的純化柱中，繼續(xù)重復離心操作，直至上柱液體全部轉移至下柱中。


三、 外泌體得率問題：


一般情況下，0.1 g組織樣品（以心肌組織為例）可以提取出100~200 ug外泌體（5E+9~1E+10 Particles總量），因不同組織外泌體含量不同，得率會有一定差異。






















編輯：小果果，轉載請注明出處：http://www.448371.com/cells/wmt/35478.html


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