臨床應(yīng)用的干細(xì)胞代次選擇

當(dāng)臨床應(yīng)用干細(xì)胞治療時(shí)，選擇哪個(gè)代次的干細(xì)胞治療更加合適，是經(jīng)常容易被問及的。這些都是應(yīng)該思考和有待解決的問題。我們都是知道，人分男女老少，而干細(xì)胞也有年輕和衰老之分，因此，細(xì)胞的代數(shù)是影響干細(xì)胞活性及臨床有效性、安全性的一個(gè)重要因素。

理論上講，細(xì)胞代數(shù)越靠前，干細(xì)胞的干性也越強(qiáng)。但是干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，干細(xì)胞有從組織微環(huán)境到體外培養(yǎng)環(huán)境的一個(gè)調(diào)整和適應(yīng)過程，一部分不適應(yīng)的細(xì)胞會(huì)被淘汰，所以在前兩三代，干細(xì)胞基因組有著不穩(wěn)定的因素，可能不宜臨床應(yīng)用。

有研究顯示，通過核型分析發(fā)現(xiàn)，在前三代細(xì)胞中，干細(xì)胞存在異常核型的比例偏高。就如間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）而言，臨床應(yīng)用的最佳代數(shù)應(yīng)該在 4~6 代。

細(xì)胞傳代

體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中的生長過程主要分為 4 個(gè)階段（如下圖）：

過了延滯期后，細(xì)胞開始分裂，進(jìn)入對數(shù)生長期。此階段，細(xì)胞數(shù)量急速增加。

細(xì)胞數(shù)量增加到一定程度時(shí)，細(xì)胞相互接觸，產(chǎn)生接觸抑制，細(xì)胞分裂生長速度減慢，直至完全停止生長，進(jìn)入穩(wěn)定期。

進(jìn)入穩(wěn)定期后，由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗，有害代謝產(chǎn)物積聚，細(xì)胞死亡數(shù)逐漸增加，進(jìn)入衰亡期。

因此，為了避免大規(guī)模細(xì)胞死亡，細(xì)胞在進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)應(yīng)及時(shí)消化，并重新接種到新的培養(yǎng)瓶中，這稱為細(xì)胞傳代。

備注：P0為剛從組織分離出來的原代細(xì)胞，一般干細(xì)胞傳代擴(kuò)增倍數(shù)為3-5倍，圖表中以3倍為例。

間充質(zhì)干細(xì)胞理論上可以長期傳代培養(yǎng)，但在臨床應(yīng)用中不建議選擇代次較高的干細(xì)胞批次。未經(jīng)體外擴(kuò)增的MSC，細(xì)胞本身是安全無害的，除非本身有某種基因缺陷，體外擴(kuò)增最大的風(fēng)險(xiǎn)在于基因突變。有一研究小組發(fā)現(xiàn)骨髓MSC體外培養(yǎng)至18代時(shí)，出現(xiàn)基因突變、染色體異常。其他大量的研究證實(shí)，MSC在體外培養(yǎng)代數(shù)過高（超過10代）的情況下才會(huì)引起染色體異常。

另一個(gè)影響干細(xì)胞回輸安全性的問題是添加物，如使用無血清培養(yǎng)基代替動(dòng)物血清培養(yǎng)；通過嚴(yán)格的無菌操作避免抗生素的使用。但對于胰酶等細(xì)胞培養(yǎng)不可替代的成分，要在回輸時(shí)嚴(yán)格質(zhì)檢以確保其無成分殘留，也是至關(guān)重要的。

因此，代次太靠前或者太靠后都不是最好的選擇，同時(shí)也要考慮培養(yǎng)條件的因素才能做出最佳的選擇。