撰文│杏 仁
編輯│李佳潞
審校│湯紅明
干細(xì)胞具有自我更新與多向分化的特性，檢驗環(huán)節(jié)是確保干細(xì)胞質(zhì)量的關(guān)鍵，其過程出現(xiàn)微小偏差都可能對結(jié)果造成巨大影響，直接關(guān)系到臨床研究的成敗，甚至危及到人民身體健康與生命安全。
主要包括準(zhǔn)入檢驗、質(zhì)量檢驗、放行檢驗和復(fù)核檢驗。
準(zhǔn)入檢驗是采集后的樣本在進(jìn)入GMP實驗室進(jìn)行快速檢驗的過程；質(zhì)量檢驗是制備完成的干細(xì)胞進(jìn)行全面檢驗的過程；放行檢驗是質(zhì)量檢驗合格的干細(xì)胞在放行入庫/臨床前進(jìn)行快速檢驗的過程；復(fù)核檢驗是第三方檢驗機(jī)構(gòu)/實驗室對干細(xì)胞質(zhì)量進(jìn)行再次審核的過程。
以上四項檢驗是保障干細(xì)胞的安全性和有效性的四道防線。
1
準(zhǔn)入檢驗
準(zhǔn)入檢驗是樣本自采集處取回后，在進(jìn)入GMP實驗室前對采集時可能暴露的樣本（例如脂肪、血液、臍帶、胎盤等）進(jìn)行生物安全性、病原體等快速檢測的過程。
檢測合格的樣本予以準(zhǔn)入GMP實驗室，進(jìn)行后續(xù)制備生產(chǎn)；對于不合格的樣本，記錄后按程序及時銷毀，不得進(jìn)入GMP實驗室用于后續(xù)制備生產(chǎn)。
2
質(zhì)量檢驗
質(zhì)量檢驗是為保證干細(xì)胞經(jīng)特定體外處理后的安全性、有效性和質(zhì)量可控性而進(jìn)行的較全面質(zhì)量檢驗。
干細(xì)胞的質(zhì)量檢驗項目包括但不限于：細(xì)胞鑒別、存活率及生長活性、純度和均一性、無菌試驗和支原體檢測、細(xì)胞內(nèi)外源致病因子的檢測、內(nèi)毒素檢測、異常免疫學(xué)反應(yīng)、致瘤性、生物學(xué)效力試驗、培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量的檢測等。
細(xì)胞鑒別 對不同供體及不同類型的干細(xì)胞進(jìn)行綜合的細(xì)胞鑒別。包括細(xì)胞形態(tài)、遺傳學(xué)、代謝酶亞型譜分析；表面標(biāo)志物鑒定；特定基因表達(dá)產(chǎn)物鑒定。 存活率及生長活性 判斷細(xì)胞活性及生長狀況。包括活細(xì)胞計數(shù)；細(xì)胞倍增時間檢測；細(xì)胞周期檢測；克隆形成率；端粒酶活性檢測等。 純度和均一性 檢測干細(xì)胞制劑進(jìn)行純度和均一性；特別是對胚胎干細(xì)胞及iPS細(xì)胞植入人體前的終末誘導(dǎo)分化產(chǎn)物。包括細(xì)胞表面標(biāo)志物鑒定；遺傳多態(tài)性；特定生物學(xué)活性。 無菌試驗和支原體 檢測細(xì)菌、真菌及支原體污染。包括依據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》中的生物制品無菌試驗和支原體檢測流程。 細(xì)胞內(nèi)外源致病因子 檢測人源和（或）動物源性特定致病因子。包括牛源特定病毒的檢測（如使用過牛血清）；豬源細(xì)小病毒檢測（如使用過胰酶等豬源材料等。 內(nèi)毒素 檢測內(nèi)毒素。包括根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》中的內(nèi)毒素檢測流程。 異常免疫學(xué)反應(yīng)（異體來源） 檢測干細(xì)胞制劑可能引起的異常免疫反應(yīng)。包括對人總淋巴細(xì)胞增殖；對不同淋巴細(xì)胞亞群增殖能力的影響；對相關(guān)細(xì)胞因子分泌的影響。 致瘤性 檢驗細(xì)胞的致瘤性。包括免疫缺陷動物體內(nèi)致瘤試驗。 生物學(xué)效力試驗 判斷干細(xì)胞制劑與治療相關(guān)的生物學(xué)有效性。包括干細(xì)胞分化潛能、誘導(dǎo)分化細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能、對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)能力、分泌特定細(xì)胞因子、表達(dá)特定基因和蛋白。 培養(yǎng)基及其他添加成分殘余量 避免制備過程中制劑殘余成分影響干細(xì)胞制劑質(zhì)量和安全性。包括牛血清蛋白、抗生素、細(xì)胞因子等殘留檢測。 3 放行檢驗 質(zhì)量檢驗合格的干細(xì)胞，在放行入庫或臨床移植前還需進(jìn)行放行檢驗。放行檢驗是在完成質(zhì)量檢驗的基礎(chǔ)上，對每一類型的每一批次干細(xì)胞制劑，在臨床應(yīng)用前所應(yīng)進(jìn)行的相對快速和簡化的細(xì)胞檢驗，以免在移植過程中或移植后出現(xiàn)急性或亞急性嚴(yán)重不良反應(yīng)，如發(fā)熱、過敏、細(xì)菌性血癥等。 放行檢測項目通常包括但不限于：細(xì)胞數(shù)量和活率、無菌檢測、支原體檢測、細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。
細(xì)胞數(shù)量和活率 選用血球細(xì)胞計數(shù)板或細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，將待檢測干細(xì)胞制劑使用0.04%臺盼藍(lán)（1:1）染色，讀取細(xì)胞數(shù)并計算活率 無菌檢測 采用熒光定量PCR方法，分別在細(xì)菌、真菌保守區(qū)序列進(jìn)行引物設(shè)計，采用含保守區(qū)序列的重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測靈敏度和限度實驗。 支原體檢測 采用熒光定量PCR方法，在支原體保守區(qū)序列16SrRNA進(jìn)行引物和序列設(shè)計，含16SrRNA序列的重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測靈敏度和限度實驗 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測 依據(jù)現(xiàn)行版《中國藥典》中的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法對內(nèi)毒素進(jìn)行檢測。 4 復(fù)核檢驗 干細(xì)胞臨床研究項目備案及干細(xì)胞藥品申報所使用的干細(xì)胞制劑須通過獨立第三方檢驗機(jī)構(gòu)/實驗室開展和完成質(zhì)量復(fù)核檢驗，并獲得檢驗報告。獲得第三方質(zhì)量復(fù)核檢驗報告，標(biāo)志著機(jī)構(gòu)具備成熟的干細(xì)胞制備工藝和完善的質(zhì)量控制體系，也標(biāo)志著機(jī)構(gòu)在干細(xì)胞生產(chǎn)制備與研究應(yīng)用領(lǐng)域的進(jìn)一步標(biāo)準(zhǔn)化與合規(guī)化。
問：什么是第三方質(zhì)量復(fù)核檢驗報告？ → 復(fù)核報告：第三方質(zhì)量復(fù)核檢驗報告是由具備資質(zhì)的第三方檢驗機(jī)構(gòu)復(fù)核干細(xì)胞制劑質(zhì)量檢測結(jié)果后出具的干細(xì)胞制劑質(zhì)量復(fù)核報告。 → 機(jī)構(gòu)資質(zhì)：該機(jī)構(gòu)應(yīng)具有CMA（檢驗檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定標(biāo)志）證書，具有相對的獨立性和公正性，有資格向社會出具公正數(shù)據(jù)（檢驗報告）。 → 權(quán)威機(jī)構(gòu)：取得中國食品藥品檢定研究院（簡稱中檢院）質(zhì)量認(rèn)定，是具備臨床級別干細(xì)胞制劑生產(chǎn)的能力的象征。
此外，干細(xì)胞制劑各項檢驗過程需由獨立的干細(xì)胞制劑質(zhì)量受權(quán)人進(jìn)行嚴(yán)格把關(guān)，每批干細(xì)胞制劑均應(yīng)由質(zhì)量受權(quán)人簽名批準(zhǔn)放行。 問：什么是干細(xì)胞制劑質(zhì)量受權(quán)人？ → 工作職責(zé)：負(fù)責(zé)審核干細(xì)胞制備批記錄，確保每批臨床研究用干細(xì)胞制劑的生產(chǎn)、檢驗等均符合相關(guān)要求。 → 任職條件：應(yīng)當(dāng)具備醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)背景，具有正高級專業(yè)技術(shù)職稱，具有良好的科研信譽(yù)，具有至少三年從事干細(xì)胞制劑（或相關(guān)產(chǎn)品）制備和質(zhì)量管理的實踐經(jīng)驗，從事過相關(guān)產(chǎn)品過程控制和質(zhì)量檢驗工作。 → 獲得授權(quán)：應(yīng)當(dāng)由機(jī)構(gòu)主要負(fù)責(zé)人正式授權(quán)。
習(xí)近平總書記強(qiáng)調(diào)，“標(biāo)準(zhǔn)決定質(zhì)量，有什么樣的標(biāo)準(zhǔn)就有什么樣的質(zhì)量，只有高標(biāo)準(zhǔn)才有高質(zhì)量?。”可見，質(zhì)量基礎(chǔ)的核心是標(biāo)準(zhǔn)。在干細(xì)胞制備質(zhì)檢的過程中，要謹(jǐn)記質(zhì)量提升，標(biāo)準(zhǔn)先行。目前可供參考的標(biāo)準(zhǔn)包括： ???中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會于2016年發(fā)布的《干細(xì)胞制劑制備質(zhì)量管理自律規(guī)范》 ???中國整形美容協(xié)會于2019年發(fā)布的《干細(xì)胞制劑制備與質(zhì)檢行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（試行）》 ???國家干細(xì)胞轉(zhuǎn)化資源庫于2021年發(fā)布的《干細(xì)胞制劑放行檢驗規(guī)范（試行）》
同濟(jì)大學(xué)附屬東方醫(yī)院干細(xì)胞基地GMP實驗室已經(jīng)建立“五縱五橫”的干細(xì)胞質(zhì)檢質(zhì)控體系，即以臨床部、制備部、質(zhì)檢部、樣本部、質(zhì)量部全流程五位一體信息管理系統(tǒng)為依托、從人機(jī)料法環(huán)五個層面，涵蓋干細(xì)胞全生命周期，形成“要素齊全，互通互聯(lián)”的內(nèi)部質(zhì)量保證體系，確保干細(xì)胞制備質(zhì)檢平臺有形有序的發(fā)展。 GMP實驗室主要功能包括具備誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞等10余種細(xì)胞的制備技術(shù)體系和對應(yīng)質(zhì)檢質(zhì)控體系。 目前，GMP實驗室制備的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞以及人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞已獲得中檢院質(zhì)量復(fù)核報告。現(xiàn)正在與中檢院合作開展人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞質(zhì)檢穩(wěn)定性研究以及人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化的心肌細(xì)胞質(zhì)量研究，且后續(xù)人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化的間充質(zhì)干細(xì)胞、人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞分化的神經(jīng)干細(xì)胞的質(zhì)量研究將陸續(xù)展開。
ID:sckp2023021800901
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